Спартак Мишулин родился в 1926 г. в Москве. Точная дата рождения не известна: в документах указано 22 октября, однако, по семейному преданию, счастливое событие произошло на полгода раньше - 22 апреля.
Мать мальчика, Анна Васильевна Мишулина, была замнаркома промышленности. Отец неизвестен, отчество Спартак получил от отчима. В 1937 г. Анна Мишулина была арестована, признана врагом народа и сослана в Ташкент. Ребенка воспитывал дядя Александр Мишулин, ректор Академии общественных наук.
С детства Спартак был увлечен театром, играл в самодеятельности, за что и пострадал - попался на краже электрических лампочек и книг из библиотеки, необходимых для спектакля. Был осужден на три года, но и в лагере продолжал играть. В результате его талант заметили и предложили должность завклубом.
Вернувшись в начале 1950х годов в Москву, пробовал поступить в ГИТИС, но неудачно. В итоге уехал в Калинин (ныне Тверь), закончил там театральную студию при местном театре и поступил в труппу.
В 1960 г. во время гастролей Калининского областного драмтеатрав Москве был замечен столичными режиссерами и приглашен сразу в несколько трупп. Мишулин выбрал Театр Сатиры, где и прослужил 45 лет, до самой смерти.
В 1968 г. впервые сыграл роль Карлсона в спектакле «Малыш и Карлсон, который живёт на крыше» и с тех пор не отказывался от нее.
Всесоюзную известность актеру принесла роль пана Директора в телепередаче "Кабачок "13 стульев". Всего в его послужном списке - десятки ролей в театре, кино, на телевидении.
Скончался Спартак Мишулин на 79-м году жизни 17 июля 2005 года - через три дня после операции на сердце. Похоронен на Ваганьковском кладбище.
Женат актер был один раз - на Валентине Константиновне Казаковой (1945 г.р.). В 1979 г. у пары родился единственный ребенок - дочь Карина. Актеру было на тот момент 54 года.
Впрочем, летом 2017 г. появилась информация, что у Мишулина есть еще дети. По крайней мере, некий Тимур Еремеев, внешне очень похожий на артиста, назвал себя его внебрачным сыном. Вдова актера отрицала романы умершего мужа на стороне, пыталась защитить честь и достоинство в суде, однако исковые требования были отклонены.
Между тем результаты ДНК-теста, которые предоставил Еремеев, свидетельствуют о том, что он с большой долей вероятности сын Спартака Мишулина.